ที่มา:วิทยาสารเกษตรศาสตร์ สาขา วิทยาศาสตร์

หัวเรื่อง:ไม่มีชื่อไทย (ชื่ออังกฤษ : A Deletion Mutant Generating by Replacement Construct in Sorbitol Dehydrogenase of Ralstonia solanacearum Bacterial Wilt Strain)

ผู้เขียน:ดวงแข กาญจนโสภา, ดร.ศรีเมฆ ชาวโพงพาง, ผู้ช่วยศาสตราจารย์, นางสาวอรวรรณ (ยกเลิก) ชัชวาลย์การพาณิชย์ (ยกเลิก), ดร.วิชัย โฆสิตรัตน, รองศาสตราจารย์, ดร.นิพนธ์ ทวีชัย, ศาสตราจารย์

สื่อสิ่งพิมพ์:pdf

Abstract

A method for making precise mutations in the Ralstonia solanacearum genome at frequencies high enough to allow direct identification of mutants by PCR or other screening methods rather than by selection was developed. This method utilized a novel pBR322-based gene replacement vector that acted as a donor plasmid carrying the desired mutation into the target cell. Single-crossover occurred resulting in efficient replacement of the wild type allele on the chromosome by the modified sequence. The precision of this method was demonstrated by making deletion mutants in sorbitol dehydrogenase gene of R. solanacearum. Sorbitol dehydrogenase (polS) of R. solanacearum biovar 3 race 1 was cloned and further mutated by site direct mutagenesis by overlapping PCR to eliminate NADP binding and active sites. The deleted polS construct (DpolS) was introduced to R. solanacearum by triparental mating. Homologous recombination mutants were screened based on antibiotic resistance and biochemical properties.

Article Info

Agriculture and Natural Resources -- formerly Kasetsart Journal (Natural Science), Volume 040, Issue 4, Oct 06 - Dec 06, Page 902 - 913 |  PDF |  Page